کلون نمونه جهش یافته rice-nsltp2 با هدف افزایش کارآمدی زیستی آن

nsltps جز رایج ترین و فراوان ترین پروتئین های محلول در گیاهان هستند. ltpها به مولکول ها و لیپیدهای مختلفی می توانند متصل شوند و به همین دلیل آنها را با نام عمومی پروتئین های ناقل لیپید غیراختصاصی ns-ltp می شناسند. این پروتئین های قلیایی کوچک به دو دسته (9kda) nsltp1 و (7kda) nsltp2 تقسیم می شوند. nsltp2 در مقایسه با nsltp1 کمتر شناخته شده است. این پروتئین ها از لحاظ ساختاری از nsltp1 کوچکتر بوده و به دلیل ساختار ویژه خود توانایی انتقال ترکیبات لیپیدی مختلفی مثل استرول ها را دارد. به دلیل عملکردهای گستردهnsltp2s ، استفاده از آنها در سیستم-های تحویل دارو مورد توجه زیادی قرار گرفته است. اسیدآمینه های سیستئین موجود در هر دو گروه از nsltps با تشکیل پیوندهای دی سولفیدی، سبب پایداری و استحکام ساختار آنها می شود. هدف این پژوهش بهبود تمایل اتصالی nsltp2 برنج ایرانی با ایجاد جهش f39a و توسط روش soeing pcr است که جهش فوق با استفاده از واکنش تعیین توالی تایید شده است. انتظار می رود با ایجاد این جهش برخی از خصوصیات این پروتئین مانند هیدروفوبیسسته جایگاه فعال و تمایل اتصال آن به مولکول های هیدروفوب افزایش یابد. بنابراین، ژن جهش یافته حاصل در ناقل های ptz57r/t و pet32a کلون شد. سپس ناقل بیانی pet32a به سویه بیانی مناسبe.coli (bl21(de3)plyss)، منتقل شد. بیان پروتئین موردنظر با کمک روش sds-page تایید شد. بیان پروتئین موردنظر پس از بهینه سازی با کمک روش sds-page تایید شد. پروتئین حاصل، با کمک ستون کروماتوگرافی نیکل- سفارز خالص سازی و غلظت آن توسط آزمون بردفورد تعیین شد. در مطالعه مجزایی، با استفاده از ابزارهای بیوانفورماتیکی ساختار پروتئینی، ویژگی های آنتی ژنی و مدل سازی پروتئین طبیعی و انواع جهش یافته مورد بررسی قرار گرفت. نتایج تحقیق حاضر نشان داد که در صورت اعمال تغییراتی در توالی و حذف بخش های آلرژن nsltp2 برنج ایرانی می توان بازده آن را در سیستم های تحویل دارو افزایش داد.